大蒜素 山东农业大学关于学位论文原创性和使用授权的声明

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氢火焰离子化检测器高效液相色谱红外光谱5,5'-二硫代双-(2-硝基苯甲酸)聚乙二醇8000磷酸吡哆醛高效液相色谱吩嗪硫酸甲酯高效液相色谱红外光谱2 ． 硝基。 5.硫代苯甲酸聚乙二醇8000磷酸吡哆醛甲基硫酸吩嗪SACSS-烯丙基-L-半胱亚砜S。 烯丙基。 湖半胱氨酸亚砜TCAT三氯乙酸TCL薄层色谱UV紫外可见光谱紫外光谱目录摘要……………………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………l 摘要………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………。 1升。 1 大蒜…………………………………………………………………………………………。 11.1.1 大蒜概述................................................................ ...................................................... ……． 11.1.2 大蒜化学成分…………………………………………………… ． 11.1.3 国内外大蒜产业现状………………………………………… ． 11.2 大蒜素………………………………………………………………。 21.2.1 大蒜素的形成………………………………………………………… ． 21.2.2 大蒜素的性质和稳定性…………………………………………。 ． 31.2.3 大蒜素的生理作用………………………………………………。 ． 31.3 蒜氨酸和蒜氨酸酶……………………………………………………。 41.3.1 蒜氨酸的性质……………………………………………………。 ． 41.3.2 蒜氨酸的提取、分离和纯化…… 41.3.3 蒜氨酸酶的性质…………………………………………。 ． 61.3.4 蒜氨酸酶的提取和分离………………………………………………。 ． 71.4 国内外大蒜素提取技术 71.4.1 水蒸气蒸馏...................................... ...................................................... ……………… ． 71.4.2 溶剂萃取法........................................................ ...................................................... ……． 81.4.3 超临界CO2萃取法………………………………………………。 81.5 国内外大蒜素检测方法………​​………………………………… 81.5.1 硫测定方法................................................................ ...................................................... ……． 81.5.2 硝酸汞滴定法……………………………………………………。 ． 81.5.3 色谱法………………………………………………………………。 ． 91.5.4 生物检测方法................................................................ ...................................................... ..... 101.5.5 分光光度法 ................................................. ………………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………………………………… .6.1 目的学习 ................................................. ...................................................... 111.6.2 研究的意义................................................................ ……………………………………………… 121.6.3 研究内容…………………… ……………………………………………… …122 材料和方法………​​…………………………………………………。 ． 132.1 试验材料................................................................ ...................................................... ...................... 132.2 主要试剂 ................................ ...................................................... .... ………………………………………………………… 132.3 主要仪器和设备………………………………………………………… l32。 4 试验方法................................................................ ...................................................... …………………… ． 142.4.1 大蒜素硝酸汞测定方法 142.4.2 大蒜素硫测定法……………………………………] 62.4.3 高效液相色谱法测定蒜氨酸…………………… ……………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………172 .4.4 蒜氨酸的提取、分离和纯化... 192.4.5 蒜氨酸酶的提取、粗分离和酶活性测定………………………… ……………………………………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………… 212.4.7 大蒜素含量的测定 212.4.8 不同测定方法的分析比较…………………………………… … 233 结果与分析………………………………………………………………。 ． 243.1 硝酸汞测定方法的研究成果 243.1.1 硝酸汞法中乙醚处理方法的测定………………………… 243.1.2 硝酸汞法中最佳溶剂回流的确定…… ……………………… 243.2 硫的测定方法 测定方法的研究结果…… 253.2.1 硫的测定方法中乙醚处理法的测定 .................. ……………………………………253.2。

2 定硫法中浓硝酸添加量的测定 25 3.2.3 定硫法中溶液 pH 值的测定 ................................................ ……………………………… 26 3.3 高效液相色谱法间接测定大蒜素含量的研究成果 27 3.3.1 大蒜素含量波长扫描光谱…… ……………………………………… 27 3.3.2 蒜氨酸精密度和回收率实验………………………… ……………… 27 3.3.3蒜氨酸洗脱氨浓度……………… 28 3.3.4 蒜氨酸酶 29 3.3.5 蒜氨酸最佳酶解条件的确定 30 3.3.6 大蒜素含量的测定 32 3.4 不同测定方法比较 34 3.4.1 含量同一产地不同测定方法下大蒜素的含量…………………… 34 3.4.2 不同产地不同方法测定大蒜素的含量…………………… 35 4 讨论……………… …………………………………………………………………………。 ． 37 4.1 硝酸汞的测定方法................................................................ ................................... 37 4.2 硫的测定方法 ................................. ……………………………… ……………………………………… 37 4.3 高效液相色谱法 ………………………………………………………… ……37 4.4 进一步研究方向…… …………………………………………………38 5 结论………………………………………………………………139 参考文献………… ……………………………………………………………… ． 40 致谢................................................................ ...................................................... ...................................................... 45鄂尔农业大学硕士学位论文摘要 大蒜（Allium Sativum L.）为葱科葱属植物。 其蒜氨酸在蒜氨酸酶的作用下发生反应产生大蒜素，大蒜素是大蒜的主要抗菌成分，其含量也成为评价大蒜功效的重要指标。

但由于大蒜素稳定性差、易分解，且标准品制备困难，目前尚无良好的大蒜素测定方法。 本文对大蒜素的不同测定方法进行了分析比较，提出了高效液相色谱法测定大蒜素的色谱检测条件和方法。 主要实验结果如下： 1． 改进了硝酸汞测定大蒜素含量的方法，确定处理样品中乙醚的最佳方法是蒸发，返回样品的最佳溶剂是乙醇； 预处理时，浓硝酸的最佳添加量为4mL，溶液的最佳pH值为2.0左右。 2.建立了蒜氨酸的分离纯化及转化为大蒜素的方法。 用0.5 mol/L氨水洗脱蒜氨酸，用10%（m/v）PEG 8000沉淀蒜氨酸酶，酶解大蒜素的反应条件为：温度35℃，时间0.5 h，加入L半胱氨酸控制酶促反应的进程。 3.建立了高效液相色谱法测定大蒜素的方法。 测定条件为：甲醇:水=1:9(V~)，流速0.5mL/min，检测波长214nm，蒜氨酸浓度4-12899/min。 在mL范围内线性关系良好，平均回收率为97.39%，RSD为1.5%（n=9），方法检出限为0.247mg/kg。 4、平均相对误差比较表明，HPLC法比硫测定法和硝酸汞法更准确； 大蒜素的测定可采用硫测定法和HPLC法校正的硝酸汞法。

关键词：蒜氨酸； 大蒜素； 硝酸汞测定方法； 硫测定方法； 高效液相色谱法 高效液相 11I (HPLC) 测定方法 摘要 大蒜（Allium Sativum aherbplant）主要抑菌底物大蒜，是与蒜酶发生反应的。其含量一直是大蒜的重要指标。然而，大蒜素SO标准品不稳定，目前大蒜素的测定方法较好。比较了其他测定方法大蒜素。本研究提出了高效液相色谱的色谱条件，主要结果如下： 1.对硝酸汞法大蒜素的改进，结果表明最佳处理方式为最佳溶剂固定硫法处理大蒜素溶液，硝酸最佳用量为4mL，适宜pH为试验溶液2.建立了蒜氨酸分离、纯化转化的方法。用0.5mol/L氨洗脱蒜氨酸，用10%(m/v)PEG 8000沉淀蒜氨酸酶，水解大蒜素的条件为：温度35℃，反应时间0.5h ,L-半胱氨酸能抑制酶促反应。 3.建立大蒜素的高效液相色谱法,条件为:甲醇:水=(9:1)(V),流速0.5mL/min,检测波长214nm,大蒜素显示前线性关系28I。 tg/mL，平均回收率为97.39%，RSD=I。 5%（n=9），检出限为0.247mg/kg。 4、平均相对误差显示HPLC法高于硝酸汞法，修正硫磺法硝酸汞法在调整HPLC法后均可正常。 关键词：蒜氨酸； 大蒜素； 汞氮法； 固定硫法； 高效液相色谱法